qPCR法支原體檢測程序中,陰性對照(NCS)和空白對照(BLK)的區別:陰性對照(NCS):為樣品稀釋液經核酸提取純化后所得,在提取純化前同待測樣品一樣需加入IC,NCS用于監測提取環節是否存在紕漏,比如:操作問題、試劑性能異常、提取環節出現污染等情況;空白對照(BLK):在PCR檢測環節加入的對照品,BLK為純水,不含IC/支原體核酸;BLK用于監測檢測環節是否出現污染,如:檢測試劑盒污染、試劑配制間的環境污染等;南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測樣品中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋100多種支原體DNA序列,檢測快速,專一性強,靈敏度高,性能可靠,且能提供國際第三方檢測機構出具的性能驗證報告,符合中、日、美國家的藥典要求。本公司還提供多樣化提取試劑盒,支持手工、自動化提取,自動化提取試劑盒又包括預分裝和非預分裝規格,客戶可根據實際情況進行訂購。傳統的支原體檢測方法好不好?上海肺炎支原體檢測服務
常用的支原體檢測方法有傳統的分離培養法、指示細胞培養法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養法基本不會出現假陰性結果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過也存在四個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間;二是盡管可以檢測絕大多數支原體種類,分離培養法也有力所不及的時候,例如豬鼻支原體(M.hyorhinis);三是易出現假陽性,因為在培養時需以陽性菌株為對照,易出現交叉污染;四是對實驗室條件要求比較高。杭州正揚生物支原體檢測產品支原體檢測時檢出率比較高的支原體有哪些?
中國藥典ChP2020〈9201〉對NAT法支原體檢測產品有關性能驗證的要求,包括檢測限(LOD)、專屬性、耐用性、重現性。其中對于專屬性的定義及驗證方法如下:檢測樣品中可能存在的特定微生物種類的能力。當替代方法以微生物生長作為判斷微生物是否存在時,其專屬性驗證時應確認所用培養基的促生長試驗,還應考慮樣品的存在對檢驗結果的影響。當替代方法不是以微生物生長作為判斷指標時,其專屬性驗證應確認檢測系統中的外來成分不得干擾試驗而影響結果,如確認樣品的存在不會對檢驗結果造成影響。采用替代方法進行控制菌的檢驗,還應選擇與控制菌具有類似特性的菌株作為驗證對象。
qPCR法支原體檢測試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機檢測、結果分析四個環節。支原體DNA提取包含樣品前處理(離心分離上清等)、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫;qPCR試劑在配制時需先將試劑放置于室溫,避光放置30min,直至試劑融化,各個試劑組分混勻后按照說明書進行配制并分裝。在實驗室,注意分區操作,降低實驗發生污染的風險。用qPCR法進行支原體檢測時,出現擴增曲線異常的可能原因是什么?①如出現非特異性擴增現象,該問題是由反應管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發而造成。上機前確保管蓋密閉,反應結束后查看八聯管或96孔板各管液面是否一致。與設備硬件相關,需咨詢硬件供應商解決。②如出現擴增曲線不平滑現象:可能與ROX加入量不足相關,個別設備有ROX校正功能,不同型號設備對ROX的需求量會有差異,需設置實驗摸索合適的ROX加入量。支原體檢測對實驗室要求有哪些?
支原體(mycoplasma)是目前發現的蕞小的原核生物,據統計約15-35%的細胞被支原體污染。支原體污染會改變宿主細胞的結構與功能,易致實驗結果不穩定,須對培養細胞定期進行支原體檢測。南京正揚生物科技有限公司自主研發生產的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,于定性檢測主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批以及臨床治 療用細胞中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋多種支原體DNA序列,檢測快速,專一性強,靈敏度高,性能可靠。歡迎聯系!支原體檢測和清理辦法。杭州正揚生物支原體檢測產品
支原體檢測的背景知識與法規要求。上海肺炎支原體檢測服務
南京正揚生科科技有限公司自主研發的支原體檢測試劑盒包括支原體DNA提取試劑盒(磁珠法)和支原體DNA檢測試劑盒(PCR-熒光探針法),支原體DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批以及臨床治 療用細胞中是否有支原體污染。試劑盒設置有內參(IC),可對樣品提取至PCR擴增等實驗總流程進行監控,避免出現假陰性的情況。本試劑盒涵蓋120多種支原體DNA序列,操作便捷、檢測快速、專一性強、靈敏度高,可提供合規性能驗證報告。上海肺炎支原體檢測服務